細(xì)胞培養(yǎng)需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類(lèi)、紙類(lèi)等，因此掌握清洗、消毒知識(shí)，學(xué)會(huì)清洗、消毒方法是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作必須的。

一、清洗 離體條件下，有害物質(zhì)直接同細(xì)胞接觸，細(xì)胞對(duì)任何有害物質(zhì)十分敏感，極少殘留物都可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認(rèn)真清洗，達(dá)到不含任何殘留物的要求。

（一）玻璃器皿的清洗 一般經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個(gè)步驟。

1、浸泡:新的或用過(guò)的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗，然后用5％鹽酸浸泡過(guò)夜；用過(guò)的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。

2、刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復(fù)刷洗。不要留死角，并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。

3、浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱(chēng)酸液，通過(guò)酸液的強(qiáng)氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質(zhì)。浸酸不應(yīng)少于六小時(shí)，一般過(guò)夜或更長(zhǎng)。放取器皿要小心。

4、沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸后器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿，每件器皿至少要反復(fù)“注水－倒空”15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。

（二）橡膠制品清洗

新的橡膠制品洗滌方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分鐘，流水沖洗，0.5mol/L HCl煮沸15分鐘，流水沖洗，自來(lái)水煮沸2次，蒸餾水煮沸20分鐘，50℃烤干備用。

（三）塑料制品的清洗

塑料制品特點(diǎn)：質(zhì)軟、易出現(xiàn)劃痕；耐腐蝕能力強(qiáng)、但不耐熱。

清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自來(lái)水過(guò)夜，用紗布或棉簽和50℃清洗液刷洗，流水沖洗，晾干，浸于清潔液15分鐘，流水沖洗（15－20遍）,蒸餾水浸洗三次，雙蒸水泡24小時(shí)，晾干備用。

（四）包裝:對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)用品進(jìn)行消毒前，要進(jìn)行嚴(yán)密包裝，以便于消毒和貯存。常用的包裝材料：牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、較大培養(yǎng)皿等，近幾年用鋁箔包裝，非常方便，適用。培養(yǎng)皿、注射器、金屬器械等用牛皮紙包裝后再裝入飯盒內(nèi)，較大的器皿可以進(jìn)行局部包扎。

這里的工作區(qū)域包括實(shí)驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、門(mén)把手等細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境。

使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體祛除噴霧或濕巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分鐘清除支原體，高效快速，操作方便。

產(chǎn)品特點(diǎn)及原理：

1）快速有效

噴霧劑和濕巾中含有支原體專(zhuān)用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。

與傳統(tǒng)的化學(xué)試劑熏蒸方法相比，更加安全；與傳統(tǒng)酒精處理、紫外線(xiàn)照射方法相比更有效！

2）廣譜抗菌

不僅能祛除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）無(wú)腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無(wú)腐蝕性和致癌性成分。

4）操作簡(jiǎn)便

即用型消毒液，可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

使用方法及步驟：

 

噴霧劑:

注：對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)箱，內(nèi)部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后，應(yīng)打開(kāi)箱門(mén)通風(fēng)至少1小時(shí)。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能，可開(kāi)啟該功能以替代風(fēng)干。

 

濕巾:

對(duì)于移液器，門(mén)把手，電子設(shè)備等，可使用支原體祛除濕巾。擦拭后，應(yīng)讓其被消毒物體的表面保持濕潤(rùn)，再讓其自然風(fēng)干。

培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預(yù)防支原體污染的方法

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經(jīng)常會(huì)有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時(shí)，水槽中的水源即會(huì)成為細(xì)胞污染的重要來(lái)源。

保持水槽的潔凈，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。

推薦眾多實(shí)驗(yàn)室日常都在使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Water Shield支原體污染防護(hù)劑（水槽用）。Water Shield可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細(xì)菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

 

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1）長(zhǎng)效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

2）安全。不含醛類(lèi)或疊氮化物，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害。

3）廣譜。預(yù)防支原體、細(xì)菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不產(chǎn)生水垢。

操作步驟：

1）Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5ml Water Shield，或10L蒸餾水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield。

 

注意事項(xiàng)：

避免吸入。眼睛接觸或長(zhǎng)時(shí)間皮膚接觸可能會(huì)產(chǎn)生刺激性。因而，使用試劑時(shí)應(yīng)戴上護(hù)目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸，應(yīng)用大量水沖洗。

Water Shield對(duì)玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好。